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D-熒光素鉀鹽

CAS號	115144-35-9
規格	1克	純度	98%
貨號	luc001	貨期	現貨
品牌	sciencelight	庫存	100g
規格	1克
純度	98%
貨號	luc001
貨期	現貨
品牌	sciencelight
庫存	100g
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參考價：￥6000.00 元/克

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貨號	品牌	純度	規格	參考價	貨期
luc001	sciencelight	98%	1克	￥6000.00元/克	現貨

產品詳情

詳細信息(中文)：
發光原理
哺乳動物生物發光，一般是將Firefly luciferase基因（由554個氨基酸構成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶，培養出能穩定表達熒光素酶的細胞株，當細胞分裂、轉移、分化時, 熒光素酶也會得到持續穩定的表達。基因、細胞和活體動物都可被熒光素酶基因標記。將標記好的細胞接種到實驗動物體內后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassium salt，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內產生發光現象。所發的光波長在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應才可以發光，因此只有在活細胞內才會產生發光現象，并且發光光強度與標記細胞的數目線性相關。

結構與性能
熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發生反應，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產生發光現象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個小時，只有活細胞才能夠持續表達熒光素酶。

(1) 熒光素不會影響動物的正常生理功能。
(2) 熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。
(3) 熒光素在體內擴散速度快，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進入動物體內。腹腔注射擴散較慢，持續發光長。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達熒光素酶的細胞開始發光，10min后強度達到穩定的最高點，在最高點持續約20~30 min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發光全部消失，最佳檢測時間是在注射后15~35min之間；若進行熒光素靜脈注射，擴散快，但發光持續時間很短。科研人員根據大量的實驗總結出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。
(4) 觀察時間的間隔沒有最短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內有一定的代謝過程，但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對下一次觀察結果的影響。

儲存與運輸
一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運輸放在4℃環境。

應用領域
腫瘤，干細胞，藥物開發，基因治療，轉基因小鼠，免疫學等等。

詳細信息(英文)：
Protocol 1: In Vitro Imaging of MDA-MB-231-luc and HCT116-Luc cells

Materials needed:
MDA-MB-231-luc cells (1 T175 flask)
HCT116-Luc (1 T75 flask)
Trypsin/EDTA
D-Luciferin Firefly, potassium salt（Sciencelight, Catalog# luc001）, 1.0 g /vial,
Sterile water
Complete media for each cell line
96 well black plates (Costar)
Procedure:
A. Luciferin Preparation
1. Prepare a 200X luciferin stock solution (30 mg/ml) in sterile water. Mix gently by inversion until luciferin is completely dissolved. Use immediately, or aliquot and freeze at -20?C for future use.
* Note: Reconstitute the quantity of D-Luciferin necessary for an individual experiment.
2. Prepare 2X luciferin (300ug/ml) in complete media. Quick thaw 200X stock solution and dilute 1:100 in complete media (2X solution)
* Note: This working solution should be prepared fresh for each experiment.
B. Cell Preparation and Serial Dilution
1. Trypsinize a flask and resuspend cells in a total of 10ml media.
2. Count cells and adjust cell concentration to 100,000 cells/ml = 10,000 cells/100ul.
3. Perform a serial dilution (1:2) in complete media as follows:
a. Pipette 200 ul cells into well #1 (in duplicate).
b. Add 100 ul media to wells #2-10 (in duplicate) using a multi-channel pipette.
c. Perform 1:2 serial dilution by pipetting 100ul from well #1 to well #2 using a multi-channel pipette, mixing well, then taking 100 ul from well 2 to well 3. Continue dilution to well #10 and discard 100 ul from well #10 after mixing.
C. Imaging Procedure
1. Add 100 ul 2X luciferin to cells in well #1-10.
2. Place plate of cells in the camera system on FOV15cm to view entire plate. Use the Plate Positioner or Alignment Grid to help position the plate.
3. Approximately 2-3 minutes after the addition of luciferin, image plate at 1 minute, 10 bin.
* Note: If using >10,000 cells in well #1, imaging time should de decreased.
D. Data Analysis
1. Apply grid ROI to image; measure photons/well.
2. Export measurements from